产品概述
本试剂盒是piggyBac转座子系统试剂盒,可提供细胞和PB系统质粒。PB系统质粒包含有:一个辅助质粒:编码转座酶;一个转座子质粒:两端含转座子特异性反向重复序列(ITR),中间是被转座基因区域,可转座到宿主基因组中。实验时需同时将辅助质粒和转座子质粒共同转染靶细胞,辅助质粒编码的转座酶识别转座子质粒两端的ITR序列并切割,释放的被转座基因区域由转座酶整合到宿主基因组中含TTAA序列的位点,并在被转座区两端出现TTAA重复序列,当再次转染辅助质粒时转座酶可将基因组中的转座子移除。
piggyBac转座子系统作为非病毒载体,与传统的病毒载体相比,PiggyBac具有以下优势:安全性高、操作方便(可直接用质粒转化细胞);载体容量大,可实现多基因的共表达;可顺利获得调节转座子质粒和辅助质粒的比例,提高外源基因的整合效率,并且可顺利获得反向PCR精确确定目的基因插入的位置;再次转座后实现转座子精确切离;宿主范围广,转座效率高,较少依赖宿主因子。
试剂盒组分
| 组分 | 规格 | 储存温度 | ||
| PB系统质粒 | 辅助质粒(500 ng/μL) | pCAG-PBase | 4 μg | -20 ℃ | 
| 转座子质粒(500 ng/μL) | PB-CMV-MCS-EFIα-CopGFP-T2A-Puro | 10 μg | -20 ℃ | |
质粒图谱示图

备注:启动子可选择CMV、CAG、EF1α。
操作流程图

PB基因转座细胞株构建流程示意图
 
                    
                     
                    
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